方案概述
前言：
乙基麥芽酚作為一種高效、廣譜的香味增效劑和改良劑，被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中，以增強和調(diào)和食品的甜香、果香及奶香風(fēng)味。根據(jù)我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760-2024），乙基麥芽酚被允許在特定食品類別中按生產(chǎn)需要適量使用。然而，由于其能夠顯著掩蓋油脂可能存在的氧化異味并提升口感，近年來在食用植物油（包括大豆油）中違規(guī)添加乙基麥芽酚的現(xiàn)象時有發(fā)生。因此，建立一種準(zhǔn)確、靈敏、高效的分析方法，用于監(jiān)控大豆油等食用油中乙基麥芽酚的非法添加，對保障食品安全、維護(hù)消費者權(quán)益和市場規(guī)范具有重要的現(xiàn)實意義。
食用植物油中乙基麥芽酚的測定（BJS201708）規(guī)定了食用植物油中乙基麥芽酚的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定性確證和定量測定方法，適用于芝麻油、芝麻調(diào)和油、菜籽油等食用植物油中乙基麥芽酚的確證及測定。
大豆油基質(zhì)成分復(fù)雜，主要含有甘油三酯、游離脂肪酸、磷脂及天然生育酚等物質(zhì)，這些共存成分在分析過程中極易對目標(biāo)物乙基麥芽酚的檢測產(chǎn)生嚴(yán)重的基質(zhì)干擾。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)結(jié)合了液相色譜卓越的分離能力與串聯(lián)質(zhì)譜高選擇性、高靈敏度的檢測優(yōu)勢。該技術(shù)已成為當(dāng)前食品中痕量非法添加物分析鑒定的強有力工具。
本應(yīng)用方案成功驗證皖儀科技LCMS-TQ9200三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)分析大豆油中的乙基麥芽酚含量的結(jié)果。
關(guān)鍵詞：三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)；大豆油；乙基麥芽酚
1.儀器設(shè)備及試劑
1.1液相串聯(lián)質(zhì)譜配置清單
表1 儀器配置清單表
序號 | 名稱 | 數(shù)量 |
1 | LCMS-TQ9200液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng) | 1臺 |
2 | P3600B 二元高壓恒流泵 | 1臺 |
3 | CT3600 柱溫箱 | 1臺 |
4 | AS3600 超高效自動進(jìn)樣器 | 1臺 |
5 | SmartLab CDS 2.0色譜使用工作站 | 1套 |
6 | BEH C18 1.7 μm 2.1x50 mm | 1個 |
1.2試劑及標(biāo)準(zhǔn)品清單
表2 試劑及標(biāo)品清單表
序列 | 試劑及標(biāo)準(zhǔn)品 | 純度 |
1 | 甲醇 | LC-MS級 |
2 | 甲酸 | LC-MS級 |
3 | 乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 | 100 mg/L |
4 | 某品牌大豆油 | 1 kg |
1.3實驗材料及輔助設(shè)備
超聲波清洗機；
渦旋混合器；
高速離心機
2.實驗方法
2.1液相方法條件
色譜柱：C18, 1.7 μm 2.1x50mm
流動相：A相：0.1% 甲酸水；B相：0.1% 甲酸甲醇
流速：0.3 mL/min
柱溫：40 ℃
進(jìn)樣體積：2 μL
2.2前處理方法
準(zhǔn)確稱取10g試樣（精確至0.01g）置于50mL聚丙烯離心管中，用移液器準(zhǔn)確加入10mL甲醇，渦旋振搖2min，4℃條件下9000rpm/min 離心10 min，將上清液移入20mL具塞刻度試管中，下層油液再用10mL甲醇重復(fù)提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20mL，經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm，有機相）過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。
2.3溶劑配制
2.3.1 乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)溶液：100μg/mL，上海安譜實驗科技股份有限公司有限公司購得。
2.3.2 乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：將乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用甲醇逐級稀釋成 1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，準(zhǔn)確稱取與試樣基質(zhì)相應(yīng)的陰性試樣10g（精確至0.01g），分別加入標(biāo)準(zhǔn)系列溶液200μL，與試樣同時進(jìn)行提取，制成最終濃度為12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用時配制。
2.3.3 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀釋至1000mL，用濾膜（0.22μm，水相）過濾后備用。
2.3.4 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1mL用甲醇稀釋至1000mL，用濾膜（0.22μm，有機相）過濾后備用。
3實驗結(jié)果
3.1標(biāo)準(zhǔn)品譜圖
7分鐘內(nèi)完成乙基麥芽酚含量的測定，峰形良好，化合物響應(yīng)良好，符合實驗測定需求。
圖1 乙基麥芽酚色譜圖（250 ng/mL）
3.2線性范圍
取乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級稀釋到系列濃度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍12.5~500 ng/mL，線性檢測結(jié)果與已知濃度的偏差小于最大允許偏差，R2均大于0.9999，線性關(guān)系良好。
表3 化合物線性范圍表
化合物 | 線性范圍 | 線性相關(guān)系數(shù)R2 |
乙基麥芽酚 | 12.5~500 ng/mL | 0.99997 |
圖2 化合物線性結(jié)果
3.3檢測限與定量限
本方法中乙基麥芽酚在12.5ng/mL信噪比遠(yuǎn)大于10。其中當(dāng)S/N等于10，為理論定量限，S/N等于3，為理論檢出限，經(jīng)計算，其檢出限為1.07ng/mL，定量限為3.56ng/mL。
表4 化合物定量限與檢出限
化合物 | 信噪比（S/N） | 檢出限（ng/mL） | 定量限（ng/mL） |
乙基麥芽酚 | 35.079 | 1.07 | 3.56 |
 |
圖3 化合物定量限色譜圖
3.4精密度
取空白溶劑及陰性試樣加入乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其最終濃度為25 ng/mL，連續(xù)進(jìn)樣7針比較精密度；結(jié)果如下表所示，乙基麥芽酚RSD均在3%以內(nèi)，符合標(biāo)準(zhǔn)的≤15%的精密度要求。
表5 化合物精密度
化合物 | 樣品 | 偏差RSD |
乙基麥芽酚 | 甲醇加標(biāo) | 2.407% |
大豆油加標(biāo) | 2.915% |
圖4 甲醇加標(biāo)精密度色譜圖
圖5 大豆油加標(biāo)精密度色譜圖
3.5回收率
取100μg/mL乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用大豆油稀釋至25ng/mL，前處理提取后過濾，連續(xù)進(jìn)樣7針比較回收率；結(jié)果如下表所示，乙基麥芽酚回收率為102.53%，符合80%-120%的回收率要求。
表6 化合物回收率
化合物 | 加標(biāo)濃度(ng/mL) | 回收率% |
乙基麥芽酚 | 25 | 102.53% |
3.6空白殘留
取標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點500ng/mL后進(jìn)樣空白試劑，計算其空白殘留未檢出。
圖6 空白殘留色譜圖
3.7樣品測試
取某品牌大豆油經(jīng)過前處理后進(jìn)樣，未檢出。
圖7 樣品測試色譜圖
4.結(jié)論
本方法使用皖儀科技LCMS-TQ9200液相質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)，進(jìn)行食醋中的甜蜜素測定。由數(shù)據(jù)可得該方法的各色譜峰峰形良好、無拖尾，靈敏度符合要求，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.9999，精密度在3%以內(nèi)，加標(biāo)回收率在85-105%之間，高濃度樣本系統(tǒng)無殘留，說明了該方法配備皖儀科技液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)滿足對待測樣本的常規(guī)性定性定量檢測需求。
相關(guān)產(chǎn)品
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